由武漢大學(xué)病毒學(xué)國家重點實驗室承擔(dān)的國家“十五”重大科技專項“食品安全關(guān)鍵技術(shù)”課題“動物組織中豬瘟病毒和偽狂犬病病毒熒光定量PCR檢測技術(shù)”研究取得重要進展。通過將PCR技術(shù)、熒光能量共振轉(zhuǎn)移和核酸雜交技術(shù)相結(jié)合，建立了靈敏度高、特異性強、重復(fù)性好、能進行高通量病毒核酸定量的檢測技術(shù)，達到了課題的預(yù)期目標(biāo)，為廣泛開展食品安全關(guān)鍵技術(shù)中豬瘟病毒和偽狂犬病病毒定量檢測技術(shù)構(gòu)建了穩(wěn)定性、通用性高技術(shù)創(chuàng)新平臺。 采用數(shù)據(jù)庫序列搜索和同源性分析，選取相應(yīng)的靶序列，設(shè)計出PCR引物和探針，經(jīng)實驗優(yōu)化、驗證和重復(fù)實驗，建立了豬瘟病毒和偽狂犬病毒熒光定量的PCR檢測技術(shù)，進行了方法的特異性、敏感性和重復(fù)性實驗評價。該方法定量檢測的線性范圍為101-108拷貝病毒核酸分子，最小檢測限為10拷貝。與傳統(tǒng)病毒檢測方法對比研究證實，熒光定量PCR檢測技術(shù)比傳統(tǒng)的病毒分離和生物學(xué)試驗、電鏡觀察、免疫熒光技術(shù)、補體結(jié)合試驗、核酸雜交和聚丙烯酰胺凝膠電泳等檢測方法的靈敏度提高了2至3個數(shù)量級，重復(fù)性檢測的變異系數(shù)CV小于5％。熒光定量PCR檢測技術(shù)具有耗時短、步驟簡單、高通量和定量檢測病毒等特點，適用于動物組織中豬瘟病毒和偽狂犬病毒的快速定量檢測，實現(xiàn)病毒檢測技術(shù)的定量化、標(biāo)準(zhǔn)化和科學(xué)化。該檢測技術(shù)已獲得國家發(fā)明專利1項，申報國家發(fā)明專利1項。